结核分枝杆菌与利福平相关的耐药性检测
结核分枝杆菌与利福平相关的耐药性检测
INNO-LiPA RiF. TB
一、临床背景
结核分枝杆菌,是结核病的病原体。结核病是一种慢性传染。衫奂叭矶喔鲈嗥鳎苑尾孔钗<。流行病学调查显示40年代死亡率在200/10万以上,是各种疾病死因之首,70年代死亡率降至30/10万,死因降至第6至7位。最近几年,我国的结核发病率又有抬头趋势。传染源主要是排菌的肺结核患者,通过呼吸道传播。结核菌侵入人体后引起炎症反应,其基本病变主要有渗出、变质和增生三种。临床表现为咳痰、午后低热、乏力、盗汗等。实验室检查:痰涂片+培养、影像学检查及结核菌素试验。抗结核化疗原则:早期、连用、适量、规律和全程用药,药物有异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、链霉素、乙胺丁醇等。
二、试剂用途
INNO-LiPA RiF. TB可以检测结核杆菌,并可检测以多药物抵抗株为标志的、与利福平耐药相关的结核杆菌rpoB基因突变。
检测条上包括:5条检测敏感基因型的探针(s1-s5)和4条检测耐药基因型的探针(R2,R4a,R4b,R5)。若缺少1条或更多的敏感基因型的探针显色带,或者伴随出现1条或更多的野生型探针显色带,被判断为其对利福平耐药。
三、检测方法及原理
INNO-LiPA RiF. TB是基于反向探针杂交的原理。来自于rpoB基因的生物素标记的DNA扩增产物,与以平行线形式固定在薄膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后,未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。加入标记有碱性磷酸酶的链霉抗生物素蛋白(链亲和素),与杂交产物上标记的生物素结合。随后加入BCIP/NBT底物显色。
四、检测特点
1.便捷性:INNO-LiPA RiF. TB与利福平相关的耐药性检测试剂,同一检测条可同时检测出结核杆菌的敏感性及其对利福平的耐药性。
2.敏感性:可准确检测结核杆菌种群;在利福平的耐药性未出现时,可超前检测患者即将表现出的对利福平的耐药性。
3.特异性:确定rpoB基因是与利福平耐药性相关的突变。
4.快速简单:检测时间短,操作简单,肉眼直观判断结果。
5.重复性高,易质控、标准化操作。
五、检测步骤及时间
主要步骤
检测时间
|
|
1、杂交 | 30分钟 |
2、冲洗 | 10分钟 |
3、显色 | 60分钟 |
※扩增后总检测时间不超过2小时。